Kit FD Apop™
El kit FD Apop™ está diseñado para la detección microscópica de células en proceso de apoptosis, basándose en el principio de la técnica de marcaje de extremos de ADN in situ (TUNEL)¹. El ensayo utiliza la enzima terminal deoxinucleotidil transferasa para catalizar la incorporación de desoxiuridinas biotiniladas en los extremos 3′-hidroxilo libres de los fragmentos de ADN, que se consideran una de las características más distintivas de la apoptosis²,³. Las biotinas integradas se amplifican y visualizan mediante el método del complejo avidina-biotina (ABC)⁴, lo que permite su identificación mediante microscopía óptica.
Los reactivos y el procedimiento del kit FD Apop™ se han optimizado para lograr una alta especificidad y sensibilidad en la detección de células apoptóticas con un mínimo ruido de fondo. Este kit puede utilizarse con secciones congeladas y de parafina, así como con células cultivadas. El procedimiento dura aproximadamente 4 horas.
Información del producto
Número de catálogo Tamaño Documentación PK101 Para 50 secciones Contenido del kit
Parte I (Almacenar a -20 °C)
Enzimas digestivas 2 ml x 4 Solución de reacción A 2 ml x 2 Solución de reacción B 60 µl Solución de reacción C 40 µl Solución cromógena 20 ml Parte II (Conservar a 4 °C)
Amortiguador de equilibrio 20 ml Reactivo de detección 6 ml Solución salina tamponada con fosfato 10x 250 ml x 2 Materiales necesarios pero no incluidos
agua bidestilada
Cámara humidificada
Incubadora o baño de agua (30 °C)
Materiales y equipos histológicos, incluyendo portaobjetos para microscopio, cubreobjetos de vidrio, frascos para tinción, pinzas de punta fina, etanol, xileno o sustitutos del xileno, medio de montaje y un microscopio óptico.
Referencias
Gavrieli Y, Sherman Y y Ben-Sasson SA. (1992) Identificación de la muerte celular programada in situ mediante el marcaje específico de la fragmentación del ADN nuclear. J. Cell Biol. 119:493-501.
Wyllie AH. (1980) La apoptosis de timocitos inducida por glucocorticoides está asociada con la activación de endonucleasas endógenas. Nature. 284:555-6.
Arends MJ, Morris RG y Wyllie AH. (1990) Apoptosis: el papel de la endonucleasa. Amer. J. Pathol. 136:593-608.
Hsu SM, Raine L y Fanger H. (1981) Uso del complejo avidina-biotina-peroxidasa (ABC) en técnicas de inmunoperoxidasa: una comparación entre los procedimientos ABC y de anticuerpos no marcados (PAP). J. Histochem. Cytochem. 29:577-80.
