Kit FD NeuroApop™
El kit FD NeuroApop™ está diseñado específicamente para la detección de apoptosis neuronal en secciones de tejido del sistema nervioso central, basándose en el principio de la técnica de marcaje de extremos de ADN in situ (TUNEL)¹. El ensayo utiliza la enzima terminal deoxinucleotidil transferasa para catalizar la incorporación de desoxiuridinas biotiniladas en los extremos 3′-hidroxilo libres de los fragmentos de ADN, que se consideran una de las características más distintivas de la apoptosis²,³. Las biotinas integradas se amplifican y visualizan con el método del complejo avidina-biotina (ABC)⁴, lo que permite su identificación mediante microscopía óptica.
Los reactivos y el procedimiento del kit FD NeuroApop™ se han optimizado para lograr una alta especificidad y sensibilidad en la detección de neuronas apoptóticas con el mínimo ruido de fondo. Este kit puede utilizarse con secciones congeladas y de parafina, así como con células cultivadas (véanse las muestras fotográficas a continuación). El procedimiento del kit dura aproximadamente 4 horas.
Información del producto
Número de catálogo Tamaño Documentación PK201 Para 35 secciones Contenido del kit
Parte I (Almacenar a -20 °C)
Enzimas digestivas 2 ml x 4 Solución de reacción A 2 ml x 2 Solución de reacción B 85 µl Solución de reacción C 60 µl Solución cromógena 20 ml Parte II (Conservar a 4 °C)
Amortiguador de equilibrio 20 ml Reactivo de detección 5 ml Solución salina tamponada con fosfato 10x 250 ml x 2 Materiales necesarios pero no incluidos
agua bidestilada
Cámara humidificada
Incubadora o baño de agua (30 °C)
Materiales y equipos histológicos, incluyendo portaobjetos para microscopio, cubreobjetos de vidrio, frascos para tinción, pinzas de punta fina, etanol, xileno o sustitutos del xileno, medio de montaje y un microscopio óptico.
Referencias
- Gavrieli Y, Sherman Y y Ben-Sasson SA. (1992) Identificación de la muerte celular programada in situ mediante el marcaje específico de la fragmentación del ADN nuclear. J. Cell Biol. 119:493-501.
- Wyllie AH. (1980) La apoptosis de timocitos inducida por glucocorticoides está asociada con la activación de endonucleasas endógenas. Nature. 284:555-6.
- Arends MJ, Morris RG y Wyllie AH. (1990) Apoptosis: el papel de la endonucleasa. Amer. J. Pathol. 136:593-608.
- Hsu SM, Raine L y Fanger H. (1981) Uso del complejo avidina-biotina-peroxidasa (ABC) en técnicas de inmunoperoxidasa: una comparación entre los procedimientos ABC y de anticuerpos no marcados (PAP). J. Histochem. Cytochem. 29:577-80.
