FD Apop™ Kit
Das FD Apop™ Kit dient dem mikroskopischen Nachweis von Zellen in der Apoptose und basiert auf dem Prinzip der in situ DNA-Nick-End-Markierung (TUNEL)¹. Der Test nutzt die terminale Desoxynukleotidyltransferase, um den Einbau biotinylierter Desoxyuridine an die freien 3′-Hydroxylenden von DNA-Fragmenten zu katalysieren. Diese gelten als eines der charakteristischsten Merkmale der Apoptose²,³. Die eingebauten Biotine werden mittels Avidin-Biotin-Komplex (ABC)-Methode⁴ amplifiziert und visualisiert, was die lichtmikroskopische Identifizierung ermöglicht.
Die Reagenzien und das Verfahren des FD Apop™ Kits wurden optimiert, um eine hohe Spezifität und Sensitivität beim Nachweis apoptotischer Zellen mit minimalem Hintergrundsignal zu erreichen. Das Kit kann sowohl für Gefrier- und Paraffinschnitte als auch für Zellkulturen verwendet werden. Die Durchführung des Kits dauert etwa 4 Stunden.
Produktinformationen
Katalognummer Größe Dokumentationen PK101 Für 50 Abschnitte Inhalt des Sets
Teil I (Bei -20°C lagern)
Verdauungsenzym 2 ml x 4 Reaktionslösung A 2 ml x 2 Reaktionslösung B 60 µl Reaktionslösung C 40 µl Chromogenlösung 20 ml Teil II (Bei 4 °C lagern)
Ausgleichspuffer 20 ml Nachweisreagenz 6 ml 10x Phosphatgepufferte Kochsalzlösung 250 ml x 2 Benötigte, aber nicht enthaltene Materialien
Doppelt destilliertes Wasser
Befeuchtete Kammer
Inkubator oder Wasserbad (30°C)
Histologische Verbrauchsmaterialien und Geräte, einschließlich Objektträger, Deckgläser, Färbegefäße, Pinzetten mit feiner Spitze, Ethanol, Xylol oder Xylol-Ersatzstoffe, Eindeckmedium und ein Lichtmikroskop.
Referenzen
Gavrieli Y, Sherman Y und Ben-Sasson SA. (1992) Identifizierung des programmierten Zelltods in situ durch spezifische Markierung der nukleären DNA-Fragmentierung. J. Cell Biol. 119:493-501.
Wyllie AH. (1980) Glukokortikoid-induzierte Thymozytenapoptose ist mit der Aktivierung endogener Endonukleasen assoziiert. Nature. 284:555-6.
Arends MJ, Morris RG und Wyllie AH. (1990) Apoptose: Die Rolle der Endonuklease. Amer. J. Pathol. 136:593-608.
Hsu SM, Raine L und Fanger H. (1981) Verwendung des Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplexes (ABC) in Immunperoxidase-Techniken: ein Vergleich zwischen ABC- und unmarkierten Antikörper-Verfahren (PAP). J. Histochem. Cytochem. 29:577-80.
