Detección de apoptosis neuronal: técnica de marcaje de extremos de ADN in situ en el cerebro.

El tejido congelado sin fijar se cortará en un criostato y se montará en portaobjetos resistentes a las proteinasas (véase Productos, Cat. n.º PO102). A continuación, se procesarán secciones cortadas a través de diferentes niveles (o los niveles que usted elija) en portaobjetos para la detección de neuronas en proceso de apoptosis mediante el marcaje in situ de los extremos de las muescas del ADN¹.

Esta técnica, descrita originalmente por Gavrieli et al. (1992)¹, marca los núcleos de las neuronas que experimentan fragmentación del ADN. Este método se basa en la capacidad de la desoxinucleotidil transferasa terminal para catalizar la incorporación de desoxiuridinas biotiniladas en los extremos 3′-hidroxilo libres de los fragmentos de ADN, lo que se considera una de las características más distintivas de la apoptosis²,³. Las biotinas integradas se amplifican y visualizan mediante el método del complejo avidina-biotina (ABC)⁴ ( véanse las muestras fotográficas).

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1. Gavrieli Y, Sherman Y y Ben-Sasson SA: Identificación de la muerte celular programada in situ mediante el marcaje específico de la fragmentación del ADN nuclear. J. Cell Biol. 119: 493-501, 1992.
2. Wyllie AH (1980) La apoptosis de timocitos inducida por glucocorticoides está asociada con la activación de endonucleasas endógenas. Nature 284: 555-556.
3. Arends MJ, Morris RG y Wyllie AH (1990) Apoptosis: el papel de la endonucleasa. Amer. J. Pathol. 136: 593-608.
4. Hsu SM, Raine L. y Fanger H. (1981) Uso del complejo avidina-biotina-peroxidasa (ABC) en técnicas de inmunoperoxidasa: una comparación entre los procedimientos ABC y de anticuerpos no marcados (PAP). J. Histochem. Cytochem. 29: 577-580.