Nachweis neuronaler Apoptose – In-situ-DNA-Nick-Endmarkierungstechnik im Gehirn
Dieser Service umfasst das Schneiden, die TUNEL-Markierung, das Eindecken und Beschriften der Objektträger. Sie erhalten dadurch bis zu 40 TUNEL-markierte Schnitte pro Gehirn oder Gewebeblock, die für die mikroskopische Untersuchung bereit sind.
Verfahren
Unfixiertes, gefrorenes Gewebe wird mit einem Kryostaten geschnitten und auf proteinaseresistente Objektträger aufgebracht (vgl. Produkte, Kat.-Nr. PO102). Schnitte durch verschiedene Schichten (oder die von Ihnen gewählten Schichten) werden anschließend auf Objektträgern für den Nachweis von Neuronen, die Apoptose durchlaufen, mittels in situ DNA-Nick-Endmarkierung¹ weiterverarbeitet.
Diese ursprünglich von Gavrieli et al. (1992)¹ beschriebene Technik markiert die Zellkerne von Neuronen, die eine DNA-Fragmentierung aufweisen. Die Methode basiert auf der Fähigkeit der terminalen Desoxynukleotidyltransferase, biotinylierte Desoxyuridine an die freien 3′-Hydroxylenden von DNA-Fragmenten einzubauen. Dies gilt als eines der charakteristischsten Merkmale der Apoptose²,³. Die eingebauten Biotine werden mittels der Avidin-Biotin-Komplex-Methode (ABC-Methode)⁴ amplifiziert und visualisiert ( siehe Abbildungsbeispiele).
Anmerkungen
- Vor der Bestellung ist ein Angebot erforderlich.
- Der Ermittler muss unfixiertes, gefrorenes Gewebe zur Verfügung stellen.
- Für weitere Informationen kontaktieren Sie uns bitte.
Referenzen
- Gavrieli Y, Sherman Y und Ben-Sasson SA: Identifizierung des programmierten Zelltods in situ durch spezifische Markierung der nukleären DNA-Fragmentierung. J. Cell Biol. 119: 493-501, 1992.
- Wyllie AH (1980) Glukokortikoid-induzierte Thymozytenapoptose ist mit der Aktivierung endogener Endonukleasen assoziiert. Nature 284: 555-556.
- Arends MJ, Morris RG und Wyllie AH (1990) Apoptose: Die Rolle der Endonuklease. Amer. J. Pathol. 136: 593-608.
- Hsu SM, Raine L. und Fanger H. (1981) Verwendung des Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplexes (ABC) in Immunperoxidase-Techniken: ein Vergleich zwischen ABC- und unmarkierten Antikörper-Verfahren (PAP). J. Histochem. Cytochem. 29: 577-580.